乾熱滅菌及濕熱滅菌之操作(B-1)

一、實驗目的

  學習如何正確的操作乾熱滅菌氣(oven)、高壓殺菌斧濕熱滅菌(autoclave)

他是乾熱滅菌氣(oven)

他是高壓滅菌斧--溼熱滅菌的內部(autoclave)

二、實驗原理

1.乾熱滅菌:適用於乾燥的玻璃器皿，如:試管、玻璃培養皿、定量吸管等。

2.濕熱滅菌:是用於耐高溫之培養基，或其他稀釋用之無菌水、生理食鹽水等，其他欲清洗的污染器材或已使用欲丟棄之培養皿。

三、藥品材料及儀器器具

1.生理食鹽水  1公升

2.培養液  1公升

3.鋁箔  1捲

4.脫脂棉花  1包

5.試管2*15(製作棉花塞)

6.三角瓶(250ml)

7.培養皿

8.刻度吸量管

9.不銹鋼桶(大小各一；莊克度吸量館及培養皿)

10.乾熱滅菌附計時器

11.高壓殺菌斧附計時器

12.不鏽鋼欄

13.螺帽試管

14.安全吸球

15.量筒100ml

16.試管架(12孔)

四、實驗步驟

配置培養基

每個人會拿到6個培養皿，每個培養皿要有培養液15g 15/6=90g為了方便計算用100g

細菌培養基計算1000ml的RO水要40g的agar 我們只要100g所以需要4g的agar(三人份)

配置完成後要用鋁箔封住三角瓶再用滅菌膠帶貼住鋁箔

agar

agar

將agar倒入三角瓶

乾熱滅菌(170度2小時)

1.製作試管棉花塞

2.製作三角瓶棉花塞

  (做法如下，棉花大小不一樣)

說明:取適當大小之棉花
         將棉花捲成一長條
         將捲成一長條之棉花對折
         將以對折之棉花塞入試管

3將定量吸管(刻度吸量館)尖端朝下輕輕放入不鏽鋼罐中
4.將培養皿組合好後倒放入(屁股朝上)不鏽鋼罐中
5.將以上物品至於乾熱滅菌器中，將門關上開啟電源，並設定(170度2小時)結果報告要寫

濕熱滅菌(121度，15分)結果報告要寫

1.將高壓滅菌斧之排水閥關上並加入適量的RO水(超過底下水盤一點但不可超過不銹鋼籃底部)

2.將適量的培養液及生理食鹽水分別裝入螺帽試管及三角瓶放入已加水之之高壓滅菌斧

3.關上高壓滅菌斧，打開排氣閥，打開電源並設定15分鐘(如果有timer，此步驟還沒開始計時)加熱一段時間後排氣閥開始滴水排氣，約等3分鐘後將排氣閥關閉

4.高壓殺菌斧持續加熱至121度，而壓力上升至1.05-1.06kg/cm²(或15lb/in²)

5.當溫度達到121度食計時器開始計時

6.計時器歸零，綠當亮，表示殺菌完全。(會因機種不同而不一樣)

7.將電源關閉壓力下降至1kg/cm²以下，慢慢打開排氣閥(半圈半圈轉，因為避免斧內突然快速減壓，而衝出)

8.排氣並降溫壓力下降至0時，打開高壓斧的蓋子並於適當溫度取出滅菌的東西，將蓋子拴緊